ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是現(xiàn)代生命科學(xué)領(lǐng)域一項(xiàng)不可或缺的基石技術(shù)。無論是在疾病診斷、藥物研發(fā)還是基礎(chǔ)科研中，它都為研究人員提供了高靈敏度、高特異性的檢測(cè)手段，能夠?qū)ξ⒘可锓肿舆M(jìn)行精確定量。那么，ELISA是什么檢測(cè)方法？本文將為您詳細(xì)解讀。

什么是ELISA

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法ELISA（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay），是一種將抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)與酶的高效催化作用相結(jié)合的檢測(cè)技術(shù)。其核心原理（以最常見的雙抗體夾心法為例）可分為以下幾個(gè)步驟：

1.包被：將特異性的捕獲抗體固定（包被）在固相載體（如96孔酶標(biāo)板）的表面，然后洗滌去除未結(jié)合的抗體。

2.加樣：加入待測(cè)樣本，如果樣本中含有目標(biāo)抗原，它就會(huì)與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。之后洗滌，去除樣本中其他未結(jié)合的雜質(zhì)。

3.加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體。該抗體能與已經(jīng)被捕獲的抗原上的另一個(gè)位點(diǎn)結(jié)合，形成“捕獲抗體-抗原-酶標(biāo)檢測(cè)抗體”的“三明治”復(fù)合物。然后再次洗滌，去除多余的、未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。

4.顯色：加入酶的底物溶液。復(fù)合物上的酶會(huì)催化底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。

5.分析：顏色的深淺與樣本中抗原的濃度成正比。通過酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值（OD值），即可對(duì)目標(biāo)抗原進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA類型

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不同，ELISA可分為4種主要類型，以適應(yīng)不同的檢測(cè)需求。

1.直接ELISA(DirectELISA)：這是ELISA類型中比較簡(jiǎn)單的方法。將抗原固定后，直接加入被沒標(biāo)記的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)是步驟少，速度快；缺點(diǎn)是每個(gè)抗體都要單獨(dú)標(biāo)記，成本高且靈活性差。

2.間接ELISA(IndirectELISA):相比直接ELISA，間接ELISA會(huì)多出一個(gè)步驟，先加入不帶標(biāo)記的一抗，再加入能識(shí)別一抗的酶標(biāo)二抗。優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，且一種標(biāo)記二抗可用于多種不同一抗，通用性強(qiáng)，成本效益高。

3. 夾心ELISA(SandwichELISA)：這是一種將待檢測(cè)抗原夾在兩種抗體之間，像三明治一樣。先將“捕獲抗體”固定，加入樣本后捕獲抗原，再加入“檢測(cè)抗體”進(jìn)行識(shí)別。這種雙抗體識(shí)別模式使其特異性和靈敏度都非常高，是定量檢測(cè)抗原“金”標(biāo)準(zhǔn)。

4.競(jìng)爭(zhēng)ELISA(CompetitiveELISA)：當(dāng)待檢測(cè)分子量很小或抗體配對(duì)很困難時(shí)使用。樣本中的抗原會(huì)與我們加入的已知濃度抗原去“競(jìng)爭(zhēng)”結(jié)合固定抗體。樣本中的抗原越多，結(jié)合標(biāo)記抗原就越少，顏色反應(yīng)就越弱。因此，信號(hào)強(qiáng)度與濃度成反比例。因此，信號(hào)強(qiáng)度與樣本濃度成反比。

ELISA步驟

雖然不同ELISA類型細(xì)節(jié)有所不同，但核心步驟萬變不離其宗，通常在一個(gè)被稱為“ELISA板”的96孔板中進(jìn)行：

1.包被：將抗原或捕獲抗體固定在ELISA微孔板的表面。

2.封閉：用牛血清白蛋白（BSA）等無關(guān)蛋白，封閉板上未結(jié)合的位點(diǎn)，防止后續(xù)抗體非特異性吸附。

3.加樣與孵育：加入待測(cè)樣本或抗體，在特定溫度下孵育，讓抗原抗體充分反應(yīng)。

4.洗滌：吸取未結(jié)合的物質(zhì)，減少背景干擾。

5.加入酶標(biāo)抗體和底物：加入酶標(biāo)抗體，孵育并洗滌，再加入酶底物顯色。

6、終止反應(yīng)與讀板：加入終止液停止顏色反應(yīng)，并使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下讀取各孔的吸光度（OD）值，最終計(jì)算出結(jié)果。

Elisa應(yīng)用

Elisa憑借其強(qiáng)大的檢測(cè)能力，滲透在各個(gè)領(lǐng)域：

醫(yī)學(xué)診斷：檢測(cè)病毒抗體（如HIV、肝炎病毒）、激素水平（如HCG驗(yàn)孕）、腫瘤標(biāo)志物等。

食品安全：檢測(cè)食物中的過敏原、獸藥殘留、非法添加劑、致病菌毒素等。

生命科學(xué)研究：定量檢測(cè)細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等各種蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。

環(huán)境監(jiān)測(cè)：檢測(cè)水體和土壤中的農(nóng)藥殘留及工業(yè)污染物。

藥物研發(fā)：用于篩選藥物和評(píng)估藥代動(dòng)力學(xué)。

綜合上述，ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種基于抗原抗體特異性結(jié)合，并通過酶催化顯色反應(yīng)進(jìn)行定量或定性分析的強(qiáng)大免疫檢測(cè)方法。它以其多樣化的類型和標(biāo)準(zhǔn)化的操作流程，成為了現(xiàn)代科學(xué)研究和工業(yè)檢測(cè)中不可或缺的工具。

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