做完ELISA實驗后，我們要進一步做ELISA數(shù)據(jù)分析，用于定量檢測生物樣本中的特定抗體或抗原。那么，ELISA 數(shù)據(jù)分析有困惑？下面通蔚生物對ELISA數(shù)據(jù)分析進行解釋。相關(guān)閱讀:ELISA檢測試劑盒：定性與定量分析的優(yōu)勢比較

  如何分析ELISA

  1.重復(fù)兩次或三次檢測樣本以確保準(zhǔn)確性。計算每個標(biāo)準(zhǔn)、對照和樣本的平均讀數(shù)，并減去平均零標(biāo)準(zhǔn)光密度(OD)。

  2.使用軟件繪制平均吸光度與蛋白質(zhì)濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用方案中建議的方法或測試不同的方法來找到最佳擬合。相關(guān)閱讀：《elisa試劑盒如何定量蛋白濃度？通蔚帶您全面了解elisa數(shù)據(jù)》

  3.查找樣本濃度：

•   在y軸上找到吸光度值。
•   畫一條水平線到標(biāo)準(zhǔn)曲線。
•   畫一條垂直線至x軸來讀取濃度。
•   如果樣品被稀釋，則乘以稀釋因子。
•   通過計算變異系數(shù)（CV）檢查一致性；其應(yīng)≤20%。

  數(shù)據(jù)解釋

•   精心準(zhǔn)備：重復(fù)運行樣品以檢查移液的一致性并減少錯誤至關(guān)重要。
•   包括對照：在每個板上使用標(biāo)準(zhǔn)曲線、陽性對照和空白對照樣品來驗證測試并消除背景噪音。
•   適當(dāng)稀釋：稀釋樣品，使其適合標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。
•   分析數(shù)據(jù)：使用軟件創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線并從空白樣本中減去背景讀數(shù)。使用稀釋因子調(diào)整樣品濃度。計算重復(fù)的平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，以確保結(jié)果可靠且可重復(fù)。
•   確定截止值：由于因素可能有所不同，因此請單獨計算每個板的截止值。

  增強ELISA檢測中的曲線擬合

•   使用非線性回歸模型：使用4-PL或5-PL模型在ELISA檢測中進行精確的劑量反應(yīng)曲線擬合。
•   優(yōu)點：這些模型可以處理S形曲線，并考慮分析飽和度和背景噪聲。
•   評估指標(biāo)：使用RSS、R2和校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)的恢復(fù)率檢查擬合優(yōu)度。
•   加權(quán)：使用加權(quán)策略來改善曲線擬合并管理不同分析物濃度之間的變化。
•   應(yīng)用：確保精確測量，這對生物醫(yī)學(xué)研究和診斷非常重要。

  線性分析

  1.通過稀釋加標(biāo)樣品（1:2、1:4、1:8）測試ELISA準(zhǔn)確度。

  2.將稀釋樣品的OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行比較。

  3.結(jié)果應(yīng)呈現(xiàn)線性關(guān)系；也就是說，每次稀釋時OD應(yīng)按比例減少。

  4.如果結(jié)果不是線性變化，則可能存在錯誤。

  5.特定濃度的誤差表明樣品在測量前需要進一步稀釋。

  故障排除

•   背景噪音：可能是由于清洗不充分、緩沖液受污染、檢測試劑過多、抗體交叉反應(yīng)或緩沖液/分析物沉淀引起的。
•   標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳：可能是由于標(biāo)準(zhǔn)制備錯誤、降解、重構(gòu)不正確或比例問題造成的。嘗試使用對數(shù)對數(shù)或5參數(shù)邏輯等不同的比例來修復(fù)此問題。
•   優(yōu)化條件：確保檢測條件得到優(yōu)化，包括試劑濃度和孵育時間。
•   稀釋：對于高濃度的樣品，可能需要額外稀釋以適應(yīng)檢測的動態(tài)范圍。相關(guān)閱讀：《Elisa試劑盒故障排除》

  上述通蔚對ELISA試劑盒數(shù)據(jù)分析和解釋，ELISA數(shù)據(jù)分析需要嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致，遵循規(guī)范的操作流程，并使用合適的分析工具，才能獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。在進行數(shù)據(jù)分析時，要注意數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制，并結(jié)合實驗?zāi)康暮捅尘爸R，進行合理的解釋和推論。