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ELISA技術支持

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ELISA試劑盒常見問題處理

發布時間:2021-06-11     發布作者:上海通蔚生物



ELISA試劑盒常見問題處理

出現問題

出現問題的原因

解決辦法

曲           線




















OD值不正常






試劑盒未回溫

試劑盒回溫到25℃

溫度控制不好

控制正確溫度

孵育時間不準確

控制孵育時間

洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加

洗滌4-5次,每孔250ul,然后拍干

陽光直射,對著風直接吹

避風避光

酶標儀的波長錯誤

酶標儀的波長450nm

抗體的稀釋錯誤

正確的稀釋抗體

水質問題

用娃哈哈礦泉水代替


白   板

洗滌液配制錯誤

正確的配制洗滌液

少加液體(抗體、酶標記物、A液、B液)

正確的步驟加液體

錯加液體


無 梯 度

標準品也污染

換標準品點板

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

線 性 不 好

OD值不正常

控制溫度時間在做一次

人為點板

/

回  收  率






空白管陽性高

樣本本身就是陽性樣本

換陰性樣本做回收率

空白管在實驗中被污染

實驗中防止交叉污染

水質原因

用娃哈哈礦泉水代替



偏  高



添加量不準確

精準的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量多

準確的取液吹干

取到其它相層液體

取需用相吹干

復溶液未稀釋或加入量少

正確的稀釋復溶液


偏  低


添加量不準確

精準的添加量

添加濃度不適合

添加合適的濃度

取液吹干量少

準確的取液吹干

復溶液稀釋錯誤或加入量多

正確的稀釋復溶液



假陰、陽性




水質原因

點復溶液驗證

用娃哈哈礦泉水代替

實驗操作原因


吸取到其它相吹干

準確的取液吹干

離心不徹底

延長離心時間

樣本的污染

更換樣本

乳化未處理完全

溫浴(70℃)處理乳化現象

儀器試劑原因

離心管未清洗干凈

正確的洗滌器具

有機溶劑的影響

做試劑空白看影響結果

衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質)

更換衍生化試劑

與曲線好壞相關

保證曲線的正常



金標檢測(T)線顏色較淺

尿液pH偏堿性

用0.01M HCl調節尿液pH值到7.0左右。

尿樣滴加過多

重新測定,尿樣按照說明書,控制在2滴

尿液過于混濁

將尿液離心后,取上清液重新測定



金標質控(C)線不出現





測卡由于高溫、受潮等原因失效

尿樣需要重新檢測。

過了有效期失效。

該批號的金標應丟棄處理,尿液需要重新檢測

操作過程中檢測卡沒有平放,導致液體樣品直接沖過檢測區

尿樣需要重新檢測,且檢測卡平放于桌面上再加樣。

尿液樣品中含有較高的抑制或者干擾抗原抗體反應的物質(比如明礬、小蘇打、氧化劑、肌酐等)

該尿液的檢測結果無效

金標卡上在除了T和C線之外的其他地方出線

金標卡上的劃痕;膠體金在跑板過程中沒有完全跑干凈而遺留在卡上的痕跡;

該檢測卡結果不可信,尿液需要重新檢測。

實驗重復性不好

操作人員的不一致,取樣的不一致,樣本數量的多少,加樣時間的長短,洗滌條件不一致,加樣量不一致

盡量保持的實驗一致性

分析軟件的使用

不能設置和保存

正確的設置和保存

如何判斷曲線的好壞和分析結果

正確的判斷曲線的好壞和分析結果

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