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本試劑盒是以過(guò)碘酸鹽活化辣根過(guò)氧化物酶（HRP），活化的過(guò)氧化物酶通過(guò)席夫堿與抗體或蛋白上的伯胺交聯(lián)，再還原席夫堿產(chǎn)生穩(wěn)定的偶聯(lián)產(chǎn)物。 |
特點(diǎn)
1. 可偶聯(lián)0.75-3mg的抗體或蛋白，最佳的偶聯(lián)量為1mg。
2. 經(jīng)透析和濃縮提高偶聯(lián)效率和產(chǎn)物純度。
1. 取500 μl HRP溶液于5 ml離心管中，加入200 μl HRP活化緩沖液，在旋轉(zhuǎn)混懸儀上，室溫緩慢反應(yīng)30分鐘。
2. 加入200 μl HRP偶聯(lián)緩沖液，靜置30分鐘，溶液緩慢變回棕黃色。
3. 加入1 mg需偶聯(lián)的目的蛋白（體積控制在1 ml左右），用移液器輕輕混勻后，將液體轉(zhuǎn)移到透析袋中，先用透析夾固定透析袋的一端，裝入液體后再固定另一端，最后將透析袋置于2 L偶聯(lián)透析液中，將裝有透析液的容器置于磁力攪拌器上室溫透析2小時(shí)，或4℃透析過(guò)夜。
4. 透析后，將透析袋中液體轉(zhuǎn)移到5 ml離心管中，加入100 μl還原劑，室溫靜置2小時(shí)，間隔半小時(shí)用移液器輕輕混勻2-3次。至此偶聯(lián)實(shí)驗(yàn)已完成。
5. 如果需要高濃度的偶聯(lián)產(chǎn)物，將第4步液體轉(zhuǎn)移到透析袋中，直接覆蓋濃縮劑，一般濃縮10分鐘至半小時(shí)，也可根據(jù)實(shí)際需求調(diào)整濃縮時(shí)間。
HRP，HRP活化緩沖液，HRP偶聯(lián)緩沖液，偶聯(lián)透析液，還原劑，透析袋，透析夾，濃縮劑（選用）
使用說(shuō)明
組份
